近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡使我們對(duì)生物體的生命活動(dòng)規(guī)律有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。在普通中學(xué)生物教學(xué)大綱中規(guī)定的實(shí)驗(yàn)中,大部分要通過(guò)顯微鏡來(lái)完成,因此,顯微鏡性能的好壞是做好觀察實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。
近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡的機(jī)械裝置是顯微鏡的重要組成部分。其作用是固定與調(diào)節(jié)光學(xué)鏡頭,固定與移動(dòng)標(biāo)本等。主要有鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、與調(diào)焦裝置組成。
一、鏡座和鏡臂:鏡座作用是支撐整個(gè)顯微鏡,裝有反光鏡,有的還裝有照明光源。鏡臂作用是支撐鏡筒和載物臺(tái)。分固定、可傾斜兩種。
二、載物臺(tái):載物臺(tái)作用是安放載玻片,形狀有圓形和方形兩種,其中方形的面積為120mm×110mm。中心有一個(gè)通光孔,通光孔后方左右兩側(cè)各有一個(gè)安裝壓片夾用的小孔。分為固定式與移動(dòng)式兩種。有的載物臺(tái)的縱橫坐標(biāo)上都裝有游標(biāo)尺,一般讀數(shù)為0.1mm,游標(biāo)尺可用來(lái)測(cè)定標(biāo)本的大小,也可用來(lái)對(duì)被檢部分做標(biāo)記。
三、鏡筒:鏡筒上端放置目鏡,下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。分為固定式和可調(diào)節(jié)式兩種。機(jī)械筒長(zhǎng)不能變更的叫做固定式鏡筒,能變更的叫做調(diào)節(jié)式鏡筒。
四、物鏡轉(zhuǎn)換器:物鏡轉(zhuǎn)換器固定在鏡筒下端,有3—4個(gè)物鏡螺旋口,物鏡應(yīng)按放大倍數(shù)高低順序排列。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器時(shí),應(yīng)用手指捏住旋轉(zhuǎn)碟旋轉(zhuǎn),不要用手指推動(dòng)物鏡,因時(shí)間長(zhǎng)容易使光軸歪斜,使成像質(zhì)量邊壞。
五、調(diào)焦裝置:近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡上裝有粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。有的顯微鏡粗準(zhǔn)焦螺旋與裝在同一軸上,大螺旋為粗準(zhǔn)焦螺旋,小螺旋為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋;有的則分開(kāi)安置,位于鏡臂的上端較大的一對(duì)螺旋為是粗準(zhǔn)焦螺旋,其轉(zhuǎn)動(dòng)一周,鏡筒上升或下降10mm。
近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡一般由載物臺(tái)、聚光照明系統(tǒng)、物鏡,目鏡和調(diào)焦機(jī)構(gòu)組成。載物臺(tái)用于承放被觀察的物體。利用調(diào)焦旋鈕可以驅(qū)動(dòng)調(diào)焦機(jī)構(gòu),使載物臺(tái)作粗調(diào)和微調(diào)的升降運(yùn)動(dòng),使被觀察物體調(diào)焦清晰成象。它的上層可以在水平面內(nèi)沿作精密移動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng),一般都把被觀察的部位調(diào)放到視場(chǎng)中心。
聚光照明系統(tǒng)由燈源和聚光鏡構(gòu)成,聚光鏡的功能是使更多的光能集中到被觀察的部位。照明燈的光譜特性必須與顯微鏡的接收器的工作波段相適應(yīng)。物鏡位于被觀察物體附近,是實(shí)現(xiàn)*級(jí)放大的鏡頭。在物鏡轉(zhuǎn)換器上同時(shí)裝著幾個(gè)不同放大倍率的物鏡,轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器就可讓不同倍率的物鏡進(jìn)入工作光路,物鏡的放大倍率通常為5~100倍。
物鏡是顯微鏡中對(duì)成象質(zhì)量?jī)?yōu)劣起決定性作用的光學(xué)元件。常用的有能對(duì)兩種顏色的光線校正色差的消色差物鏡;質(zhì)量更高的還有能對(duì)三種色光校正色差的復(fù)消色差物鏡;能保證物鏡的整個(gè)像面為平面,以提高視場(chǎng)邊緣成像質(zhì)量的平像場(chǎng)物鏡。高倍物鏡中多采用浸液物鏡,即在物鏡的下表面和標(biāo)本片的上表面之間填充折射率為1.5左右的液體,它能顯著的提高顯微觀察的分辨率。
目鏡是位于人眼附近實(shí)現(xiàn)第二級(jí)放大的鏡頭,鏡放大倍率通常為5~20倍。按照所能看到的視場(chǎng)大小,目鏡可分為視場(chǎng)較小的普通目鏡,和視場(chǎng)較大的大視場(chǎng)目鏡(或稱廣角目鏡)兩類(lèi)。
近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器,已有300多年的發(fā)展史。自從有了顯微鏡,人們看到了過(guò)去看不到的許多微小生物和構(gòu)成生物的基本單元——細(xì)胞。不僅有能放大千余倍的光學(xué)顯微鏡,而且有放大幾十萬(wàn)倍的電子顯微鏡,使我們對(duì)生物體的生命活動(dòng)規(guī)律有了更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡在普通中學(xué)生物教學(xué)大綱中規(guī)定的實(shí)驗(yàn)中,大部分要通過(guò)顯微鏡來(lái)完成,因此,顯微鏡性能的好壞是做好觀察實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。
近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡使用方法
1.使用單筒顯微鏡時(shí),要養(yǎng)成用左眼觀察的習(xí)慣(因一般用右手畫(huà)圖),觀察時(shí)要兩眼同時(shí)睜開(kāi),不要睜一只閉一只,因?yàn)檫@樣易于疲勞。為了訓(xùn)練學(xué)生習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開(kāi)觀察,可剪一塊長(zhǎng)約14cm,寬約6cm的長(zhǎng)方形硬紙片,在靠近左端處挖一個(gè)直徑比鏡筒上端外徑略小的圓孔,把圓孔套在鏡筒上段,觀察時(shí)兩眼同時(shí)睜開(kāi),利用紙片的右端擋住右眼的視線,這樣訓(xùn)練一段時(shí)間后,就能習(xí)慣于兩眼同時(shí)睜開(kāi),然后把紙片去掉。
2.直筒顯微鏡的鏡臂與鏡座連接處,是一個(gè)機(jī)械關(guān)節(jié),可用于調(diào)節(jié)鏡筒的傾斜度,便于觀察,鏡臂不能過(guò)于后傾,一般不超過(guò)40°。但是在使用臨時(shí)裝片觀察時(shí),禁止使用傾斜關(guān)節(jié)(當(dāng)鏡筒傾斜時(shí),載物臺(tái)也隨之傾斜,載玻片上的液體易流出),尤其是裝片內(nèi)含酸性試劑時(shí)嚴(yán)禁使用,以免污損鏡體。
3.目鏡和物鏡的使用
一般都是用一個(gè)放大倍數(shù)適中的目鏡(10×)和zui低倍的物鏡開(kāi)始觀察,逐步改用倍數(shù)較高的物鏡,從中找到符合實(shí)驗(yàn)要求的放大倍數(shù)。
轉(zhuǎn)換物鏡時(shí),先用低倍鏡觀察,調(diào)節(jié)到正確的工作距離(成像zui清晰)。如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察,應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前,把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央(將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時(shí),視野中的物像范圍縮小了很多)。低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦(同高調(diào)焦)。
通常認(rèn)為,使用任何一個(gè)物鏡時(shí),有效放大倍數(shù)的上限是1,000乘它的數(shù)值孔徑,下限是250乘它的數(shù)值孔徑。如40×物鏡的數(shù)值孔徑是0.65,則上、下限分別為:1000×0.65=650倍和250×0.65≈163倍,超過(guò)有效放大倍數(shù)上限的叫做無(wú)效放大,不能提高觀察效果。低于下限的放大倍數(shù)則人眼無(wú)法分辨,不利于觀察。一般*的放大倍數(shù)范圍是500—700乘數(shù)值孔徑之間的數(shù)字。
4.油浸物鏡的使用
近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡使用油浸物鏡時(shí),一般不要使用同高調(diào)焦。同高調(diào)焦只適用于每臺(tái)顯微鏡的原配物鏡,在使用低倍和高倍物鏡時(shí),是一個(gè)有利的方便條件,但在使用油浸物鏡時(shí),則受到一定限制,一般地說(shuō),用油鏡觀察未加蓋玻片的標(biāo)本片(載玻片)時(shí),利用同高調(diào)焦的安全度較大,而對(duì)于有蓋玻片的標(biāo)本片,要小心使用,因?yàn)橛徒镧R的工作距離很短,在設(shè)計(jì)和裝配時(shí)所考慮的同高是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)厚度蓋玻片的。
載物臺(tái)和物鏡兩者必須能沿物鏡光軸方向作相對(duì)運(yùn)動(dòng)以實(shí)現(xiàn)調(diào)焦,獲得清晰的圖像。用高倍物鏡工作時(shí),容許的調(diào)焦范圍往往小于微米,所以顯微鏡必須具備為精密的微動(dòng)調(diào)焦機(jī)構(gòu)。顯微鏡放大倍率的限即有效放大倍率,近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)的zui小間距。分辨率和放大倍率是兩個(gè)不同的但又互有的概念。
當(dāng)選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大,即分辨率不夠高時(shí),顯微鏡不能分清物體的微細(xì)結(jié)構(gòu),此時(shí)即使過(guò)度地增大放大倍率,得到的也只能是一個(gè)輪廓雖大但細(xì)節(jié)不清的圖像,稱為無(wú)效放大倍率。反之如果分辨率已滿足要求而放大倍率不足,則顯微鏡雖已具備分辨的能力,但因圖像太小而仍然不能被人眼清晰視見(jiàn)。所以為了充分發(fā)揮顯微鏡的分辨能力,應(yīng)使數(shù)值孔徑與顯微鏡總放大倍率合理匹配。
聚光照明系統(tǒng)是對(duì)顯微鏡成像性能有較大影響,但又是易于被使用者忽視的環(huán)節(jié)。近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡的功能是提供亮度足夠且均勻的物面照明。聚光鏡發(fā)來(lái)的光束應(yīng)能保證充滿物鏡孔徑角,否則就不能充分利用物鏡所能達(dá)到的zui高分辨率。為此目的,在近場(chǎng)光學(xué)顯微鏡中設(shè)有類(lèi)似照相物鏡中的,可以調(diào)節(jié)開(kāi)孔大小的可變孔徑光闌,用來(lái)調(diào)節(jié)照明光束孔徑,以與物鏡孔徑角匹配。
改變照明方式,可以獲得亮背景上的暗物點(diǎn)(稱亮視場(chǎng)照明)或暗背景上的亮物點(diǎn)(稱暗視場(chǎng)照明)等不同的觀察方式,以便在不同情況下更好地發(fā)現(xiàn)和觀察微細(xì)結(jié)構(gòu)。